2.43
1.65
1.98
0.73
1.88
1.81
2.43
2.2 相対分子量分布の検量線に使用される標準物質：インスリン、ミコペプチド、グリシン-グリシン-チロシン-アルギニン、グリシン-グリシン-グリシン
3 計測機器および装置
23.2
21.4
22.2
16.1
22.3
20.8
23.9
27.5
全体的に見て、Sustar社の製品に含まれるアミノ酸の割合は、Zinpro社の製品よりも高い。
第8部 使用による影響
産卵後期における産卵鶏の生産性および卵質に対する微量ミネラルの供給源の違いの影響
製造工程
標的キレート化技術
せん断乳化技術
加圧噴霧および乾燥技術
冷凍・除湿技術
高度な環境制御技術
付録A：ペプチドの相対分子量分布の決定方法
規格の採用：GB/T 22492-2008
1. テスト原則：
高性能ゲルろ過クロマトグラフィーによって測定された。すなわち、多孔質充填剤を固定相として使用し、分離対象試料成分の相対分子量の差に基づいて、220nmの紫外線吸収波長でペプチド結合を検出し、ゲルろ過クロマトグラフィーによる相対分子量分布の決定専用のデータ処理ソフトウェア（すなわち、GPCソフトウェア）を使用して、クロマトグラムとそのデータを処理、計算して、大豆ペプチドの相対分子量と分布範囲を求めた。
2. 試薬
実験用水はGB/T6682の二次水規格を満たしている必要があり、試薬は特別な規定がない限り、分析用純度のものを使用する。
2.1 試薬にはアセトニトリル（クロマトグラフィー用純度）、トリフルオロ酢酸（クロマトグラフィー用純度）が含まれる。
2.2 相対分子量分布の検量線に使用される標準物質：インスリン、ミコペプチド、グリシン-グリシン-チロシン-アルギニン、グリシン-グリシン-グリシン
3 計測機器および装置
3.1 高性能液体クロマトグラフ（HPLC）：UV検出器とGPCデータ処理ソフトウェアを備えたクロマトグラフィーワークステーションまたはインテグレータ。
3.2 移動相真空ろ過および脱気装置
3.3 電子天秤：目盛値 0.000 1g。
4つの操作手順
4.1 クロマトグラフィー条件およびシステム適応実験（参照条件）
- 4.1.1 クロマトグラフィーカラム：TSKgelG2000swxl300 mm×7.8 mm（内径）またはタンパク質およびペプチドの定量に適した同様の性能を持つ同タイプの他のゲルカラム。
- 4.1.2 移動相：アセトニトリル＋水＋トリフルオロ酢酸＝20＋80＋0.1。
- 4.1.3 検出波長：220 nm。
- 4.1.4 流量：0.5 mL/分。
- 4.1.5 検出時間: 30分
- 4.1.6 サンプル注入量：20μL。
- 4.1.7 カラム温度：室温。
- 4.1.8 クロマトグラフィーシステムが検出要件を満たすようにするために、上記のクロマトグラフィー条件下で、ゲルクロマトグラフィーカラムの効率、すなわち理論段数（N）が、トリペプチド標準（グリシン-グリシン-グリシン）のピークに基づいて計算された10000以上であることが規定された。
- 4.2 相対分子量標準曲線の作成
- 上記で述べた、質量濃度1 mg/mLの異なる相対分子量ペプチド標準溶液を移動相マッチングにより調製し、一定の割合で混合した後、孔径0.2 μm～0.5 μmの有機相膜でろ過し、試料に注入して標準溶液のクロマトグラムを得た。相対分子量の対数を保持時間に対してプロットするか、または線形回帰により、相対分子量の検量線とその式を得た。
4.3 サンプル処理
10mLのメスフラスコに10mgの試料を正確に秤量し、少量の移動相を加え、10分間超音波振とうして試料を完全に溶解・混合し、移動相で標線まで希釈した後、孔径0.2μm～0.5μmの有機相膜でろ過し、ろ液をA.4.1のクロマトグラフィー条件に従って分析した。
- 5. 相対分子量分布の計算
- 4.3で調製した試料溶液を4.1のクロマトグラフィー条件下で分析した後、GPCデータ処理ソフトウェアを用いて試料のクロマトグラフィーデータを検量線4.2に代入することにより、試料の相対分子量とその分布範囲が得られる。異なるペプチドの相対分子量の分布は、ピーク面積正規化法を用いて、次の式に従って計算できる：X=A/A total×100
- 式中、X - サンプル中の全ペプチドに対する相対分子量ペプチドの質量分率（％）。
- A - 相対分子量ペプチドのピーク面積。
- 総A値 - 各相対分子量ペプチドのピーク面積の合計（小数点以下1桁まで計算）。
- 6．再現性
- 再現性のある条件下で得られた2つの独立した測定値間の絶対差は、2つの測定値の算術平均の15%を超えてはならない。
- 付録B：遊離アミノ酸の定量方法
- 規格の採用：Q/320205 KAVN05-2016
- 1.2 試薬および材料
- 氷酢酸：分析用純度
- 過塩素酸：0.0500 mol/L
- 指示薬：0.1％クリスタルバイオレット指示薬（氷酢酸）
- 2. 遊離アミノ酸の測定
試料は80℃で1時間乾燥させた。
試料を乾燥した容器に入れ、自然冷却して室温まで冷ますか、使用可能な温度まで冷ましてください。約0.1gの試料（0.001gの精度で）を250mLの乾燥した三角フラスコに量り取る。サンプルが周囲の湿気を吸収するのを防ぐため、速やかに次のステップに進んでください。氷酢酸25mLを加え、5分以内よく混ぜる。クリスタルバイオレット指示薬を2滴加える過塩素酸の0.0500 mol/L（±0.001）標準滴定溶液で、溶液が紫色から終点に変化するまで滴定する。
消費された標準溶液の量を記録してください。
- 同時に、ブランク試験も実施してください。
- 3．計算と結果
- 試薬中の遊離アミノ酸含有量Xは質量分率（％）で表され、次の式に従って計算されます：X = C × (V1-V0) × 0.1445/M × 100％、式中：
- C - 標準過塩素酸溶液の濃度（モル/リットル）（mol/L）
- V1 - 標準過塩素酸溶液を用いた試料の滴定に使用した体積（ミリリットル（mL））。
- Vo - 標準過塩素酸溶液を用いた滴定ブランクに使用した体積（ミリリットル（mL））。
M - サンプルの質量（グラム単位）。
| 0.1445: 標準過塩素酸溶液 [c (HClO4) = 1.000 mol / L] 1.00 mL に相当するアミノ酸の平均質量。 | 4.2.3 硫酸セリウム標準滴定溶液：濃度 c [Ce (SO4) 2] = 0.1 mol/L、GB/T601 に従って調製。 | |
| 規格の採用：Q/70920556 71-2024 | 1. 決定原理（鉄を例として） | アミノ酸鉄錯体は無水エタノールへの溶解度が非常に低く、遊離金属イオンは無水エタノールに溶解する。この2つの無水エタノールへの溶解度の差を利用して、アミノ酸鉄錯体のキレート化率を決定した。 |
| 式中：V1 - 試験溶液の滴定に消費された硫酸セリウム標準溶液の体積、mL。 | 無水エタノール。その他はGB/T 27983-2011の4.5.2項と同じである。 | 3. 分析の手順 |
| 2つの試験を並行して実施します。103±2℃で1時間乾燥させた試料0.1gを0.0001gまで正確に秤量し、無水エタノール100mLを加えて溶解し、濾過します。濾過残渣を無水エタノール100mLで少なくとも3回洗浄し、残渣を250mLの三角フラスコに移し、GB/T27983-2011の4.5.3項に従って硫酸溶液10mLを加え、GB/T27983-2011の4.5.3項「加熱溶解後冷却」に従って以下の手順を実行します。同時にブランク試験も実施します。 | 4. 総鉄含有量の測定 | 4.1 決定の原則は、GB/T 21996-2008の4.4.1項と同じです。 |
4.2. 試薬および溶液
| 4.2.1 混合酸：硫酸150mLとリン酸150mLを水700mLに加え、よく混ぜる。 | 4.2.2 ジフェニルアミンスルホン酸ナトリウム指示薬溶液：5g/L、GB/T603に従って調製。 | 4.2.3 硫酸セリウム標準滴定溶液：濃度 c [Ce (SO4) 2] = 0.1 mol/L、GB/T601 に従って調製。 | |
| 4.3 分析の手順 | 2つの試験を並行して実施します。0.1gの試料を0.20001gまで正確に秤量し、250mLの三角フラスコに入れ、10mLの混合酸を加え、溶解後、30mLの水とジアニリンスルホン酸ナトリウム指示薬溶液を4滴加え、GB/T21996-2008の4.4.2項に従って以下の手順を実行します。同時にブランク試験も実施します。 | 4.4 結果の表示 | アミノ酸鉄錯体の総鉄含有量X1は、鉄の質量分率（%で表される値）として、式（1）に従って計算された。 |
| X1=(V-V0)×C×M×10⁻³×100 | V0 - ブランク溶液の滴定に消費された硫酸セリウム標準溶液、mL。 | V0 - ブランク溶液の滴定に消費された硫酸セリウム標準溶液、mL。 | C - 硫酸セリウム標準溶液の実際の濃度、mol/L5. キレート中の鉄含有量の計算キレート中の鉄含有量X2は、鉄の質量分率（%で表される値）として、次の式に従って計算されました。x2 = ((V1-V2) × C × 0.05585)/m1 × 100 |
| 式中：V1 - 試験溶液の滴定に消費された硫酸セリウム標準溶液の体積、mL。 | V2 - ブランク溶液の滴定に使用された硫酸セリウム標準溶液、mL。nom1：試料の質量（g）。並行測定結果の算術平均を測定結果とし、並行測定結果の絶対差は0.3%以下とする。 | 0.05585 - 硫酸セリウム標準溶液 C[Ce(SO4)2.4H20] = 1.000 mol/L 1.00 mL に相当するグラムで表した二価鉄の質量。nom1：試料の質量（g）。並行測定結果の算術平均を測定結果とし、並行測定結果の絶対差は0.3%以下とする。 | 6. キレート化率の計算キレート化率X3（パーセントで表した値）は、X3 = X2/X1 × 100 で表されます。付録C：ジンプロのキレート化率の測定方法 |
規格の採用：Q/320205 KAVNO7-2016
1. 試薬および材料
a) 氷酢酸：分析用純度； b) 過塩素酸：0.0500mol/L； c) 指示薬：0.1%クリスタルバイオレット指示薬（氷酢酸）
2. 遊離アミノ酸の測定
2.1 サンプルは80℃で1時間乾燥させた。
2.2 サンプルを乾燥した容器に入れ、自然冷却して室温まで冷ますか、使用可能な温度まで冷まします。
2.3 約0.1gの試料（0.001gの精度）を250mLの乾燥した三角フラスコに秤量する。
2.4 サンプルが周囲の湿気を吸収するのを防ぐため、速やかに次のステップに進んでください。
2.5 氷酢酸25mLを加え、5分以内よく混ぜます。
2.6 クリスタルバイオレット指示薬を2滴加える。
2.7 0.0500 mol/L (±0.001) の過塩素酸標準滴定溶液で滴定し、溶液の色が紫から緑に変化して15秒間変色しない状態を終点とする。
2.8 消費された標準溶液の量を記録する。
2.9 同時にブランク試験を実施する。
- 3．計算と結果
- カタルーニャ語
- Physicochemical parameters
V1 - 標準過塩素酸溶液を用いた試料の滴定に使用した体積（ミリリットル（mL））。
Vo - 標準過塩素酸溶液を用いた滴定ブランクに使用した体積（ミリリットル（mL））。
c) Chelation rate: ≥ 95%
d) Arsenic: ≤ 2 mg/kg
e) Lead: ≤ 5 mg/kg
f) Cadmium: ≤ 5 mg/kg
g) Moisture content: ≤ 5.0%
h) Fineness: All particles pass through 20 mesh, with a main particle size of 60-80 mesh
住所：中国四川省成都市浦江県寿安鎮青浦路147号
電話番号：86-18880477902
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| Application object | Suggested dosage (g/t full-value material) | Content in full-value feed (mg/kg) | Efficacy |
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| Aquatic animals | 日本語 | 韓国語 | アラビア語 ギリシャ語 |
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| Ruminant animal g/head day | January 0.75 | インドネシア語 アフリカーンス語 スウェーデン語 |
研磨
- バスク語
- カタルーニャ語
- Physicochemical parameters
ヒンディー語
ラオス
c) Chelation rate: ≥ 95%
d) Arsenic: ≤ 2 mg/kg
e) Lead: ≤ 5 mg/kg
f) Cadmium: ≤ 5 mg/kg
g) Moisture content: ≤ 5.0%
h) Fineness: All particles pass through 20 mesh, with a main particle size of 60-80 mesh
ショナ
ブルガリア語
- セブアノ語
- This product is chemically stable and can significantly reduce its damage to vitamins and fats, etc. The use of this product is conducive to improving feed quality;
- The product is absorbed through small peptide and amino acid pathways, reducing the competition and antagonism with other trace elements, and has the best bio-absorption and utilization rate;
- クロアチア語
オランダ語
| Application object | ウルドゥー語 ベトナム語 | Content in full-value feed (mg/kg) | Efficacy |
| グジャラート語 | ハイチ人 | ハウサ語 | キニャルワンダ語 モン族 ハンガリー語 |
| Piglets and fattening pigs | イボ族 | ジャワ語 | カンナダ語 クメール クルド |
| キルギス | ラテン | ||
| Bird | 300～400 | 45～60 | マケドニア語 マレー語 マラヤーラム語 |
| Aquatic animals | 200～300 | 30～45 | 1. Promote growth, improve feed conversion; 2. Improve anti-stress abolity, reduce morbidity and mortality. |
ノルウェー語
- パシュトー語
- Appearance: brownish-yellow granules
- Physicochemical parameters
セルビア語
セソト語
c) Chelation rate: ≥ 95%
d) Arsenic: ≤ 2 mg/kg
e) Lead: ≤ 5 mg/kg
f) Cadmium: ≤ 5 mg/kg
g) Moisture content: ≤ 5.0%
h) Fineness: All particles pass through 20 mesh, with a main particle size of 60-80 mesh
ショナ
シンド語
This product is an all-organic trace mineral chelated by a special chelating proces with pure plant enzymatic small molecule peptides as chelating substrates and trace elements;
スワヒリ語
タジク語
タミル語
テルグ語
タイ
| Application object | ウルドゥー語 ベトナム語 | Content in full-value feed (mg/kg) | Efficacy |
| イディッシュ語 | ヨルバ語 | ズールー語 | キニャルワンダ語 オリヤー語 トルクメン |
| ウイグル族 | 250～400 | 37.5～60 | 1. Improving the immunity of piglets, reducing diarrhea and mortality; 2. Improving palatability, increasing feed intake, increasing growth rate and improving feed conversion; 3. Make the pig coat bright and improve the carcass quality and meat quality. |
| Bird | 300～400 | 45～60 | 1. Improve feather glossiness; 2. improve the laying rate, fertilization rate and hatching rate of breeding eggs, and strengthen the coloring ability of egg yolk; 3. Improve anti-stress ability and reduce mortality; 4. Improve feed conversion and increase growth rate. |
| Aquatic animals | January 300 | 45 | 1. Promote growth, improve feed conversion; 2. Improve anti-stress abolity, reduce morbidity and mortality. |
| Ruminant animal g/head day | 2.4 | 1. Improve milk yield, prevent mastitis and foof rot, and reduce somatic cell content in milk; 2. Promote growth, improve feed conversion and improve meat quality. |
4. Manganese Amino Acid Chelate Feed Grade
- Product Name: Manganese Amino Acid Chelate Feed Grade
- Appearance: brownish-yellow granules
- Physicochemical parameters
a) Mn: ≥ 10.0%
b) Total amino acids: ≥ 19.5%
c) Chelation rate: ≥ 95%
d) Arsenic: ≤ 2 mg/kg
e) Lead: ≤ 5 mg/kg
f) Cadmium: ≤ 5 mg/kg
g) Moisture content: ≤ 5.0%
h) Fineness: All particles pass through 20 mesh, with a main particle size of 60-80 mesh
n=0, 1,2,...indicates chelated manganese for dipeptides, tripeptides, and tetrapeptides
Characteristics of Manganese Amino Acid Chelate Feed Grade
This product is an all-organic trace mineral chelated by a special chelating proces with pure plant enzymatic small molecule peptides as chelating substrates and trace elements;
This product is chemically stable and can significantly reduce its damage to vitamins and fats, etc. The use of this product is conducive to improving feed quality;
The product is absorbed through small peptide and amino acid pathways, reducing the competition and antagonism with other trace elements, and has the best bio-absorption and utilization rate;
The product can improve the growth rate, improve feed conversion and health status significantly; and improve the laying rate, hatching rate and healthy chick rate of breeding poultry obviously;
Manganese is necessary for bone growth and connective tissue maintenance. It is closely related to many enzymes; and participates in carbohydrate, fat and protein metabolism, reproduction and immune response.
Usage and Efficacy of Manganese Amino Acid Chelate Feed Grade
| Application object | Suggested dosage (g/t full-value material) | Content in full-value feed (mg/kg) | Efficacy |
| Breeding pig | 200～300 | 30～45 | 1. Promote the normal development of sexual organs and improve sperm motility; 2. Improve the reproductive capacity of breeding pigs and reduce reproductive obstacles. |
| Piglets and fattening pigs | 100～250 | 15～37.5 | 1. It is beneficial to improve immune functions, and improve anti-stress ability and disease resistance; 2. Promote growth and improve feed conversion significantly; 3. Improve meat color and quality, and improve lean meat percentage. |
| Bird | 250～350 | 37.5～52.5 | 1. Improve anti-stress ability and reduce mortality; 2. Improve laying rate, fertilization rate and hatching rate of breeding eggs, improve eggshell quality and reduce shell breaking rate; 3. Promote bone growth and reduce the incidence of leg diseases. |
| Aquatic animals | 100～200 | 15～30 | 1. Promote growth and improve its anti-stress ability and disease resistance; 2. Improve sperm motility and hatching rate of fertilized eggs. |
| Ruminant animal g/head day | Cattle 1.25 | 1. Prevent fatty acid synthesis disorder and bone tissue damage; 2. Improve reproductive capacity, prevent abortion and postpartum paralysis of female animals, reduce the mortality of calves and lambs, and increase the newborn weight of young animals. | |
| Goat 0.25 |
Part 6 FAB of Small Peptide-mineral Chelates
| S/N | F: Functional attributes | A: Competitive differences | B: Benefits brought by competitive differences to users |
| 1.52 | Selectivity control of raw materials | Select pure plant enzymatic hydrolysis of small peptides | High biological safety, avoiding cannibalism |
| 2 | Directional digestion technology for double protein biological enzyme | High proportion of small molecular peptides | More "targets", which are not easy to saturation, with high biological activity and better stability |
| 3 | Advanced pressure spray & drying technology | Granular product, with uniform particle size, better fluidity, not easy to absorb moisture | Ensure easy to use, more uniform mixing in complete feed |
| Low water content (≤ 5%), which greatly reduces the influence caused by vitamins and enzyme preparations | Improve the stability of feed products | ||
| 4 | Advanced production control technology | Totally enclosed process, high degree of automatic control | Safe and stable quality |
| 5 | Advanced quality control technology | Establish and improve scientific and advanced analytical methods and control means for detecting factors affecting product quality, such as acid-soluble protein, molecular weight distribution, amino acids and chelating rate | Ensure quality, ensure efficiency and improve efficiency |
Part 7 Competitor Comparison
Standard VS Standard
Comparison of peptide distribution and chelation rate of products
| Sustar's products | Proportion of small peptides（180-500） | Zinpro's products | Proportion of small peptides（180-500） |
| AA-Cu | ≥74% | AVAILA-Cu | 78% |
| AA-Fe | ≥48% | AVAILA-Fe | 59% |
| AA-Mn | ≥33% | AVAILA-Mn | 53% |
| AA-Zn | ≥37% | AVAILA-Zn | 56% |
| Sustar's products | Chelation rate | Zinpro's products | Chelation rate |
| AA-Cu | 94.8% | AVAILA-Cu | 94.8% |
| AA-Fe | 95.3% | AVAILA-Fe | 93.5% |
| AA-Mn | 94.6% | AVAILA-Mn | 94.6% |
| AA-Zn | 97.7% | AVAILA-Zn | 90.6% |
The ratio of small peptides of Sustar is slightly lower than that of Zinpro, and the chelation rate of Sustar's products is slightly higher than that of Zinpro's products.
Comparison of the content of 17 amino acids in different products
| Name of amino acids | Sustar's Copper Amino Acid Chelate Feed Grade | Zinpro's AVAILA copper | Sustar's Ferrous Amino Acid C helate Feed Grade | Zinpro's AVAILA iron | Sustar's Manganese Amino Acid Chelate Feed Grade | Zinpro's AVAILA manganese | Sustar's Zinc Amino Acid Chelate Feed Grade | Zinpro's AVAILA zinc |
| aspartic acid (%) | 1.88 | 0.72 | 1.50 | 0.56 | 1.78 | 1.47 | 1.80 | 2.09 |
| glutamic acid (%) | 4.08 | 6.03 | 4.23 | 5.52 | 4.22 | 5.01 | 4.35 | 3.19 |
| Serine (%) | 0.86 | 0.41 | 1.08 | 0.19 | 1.05 | 0.91 | 1.03 | 2.81 |
| Histidine (%) | 0.56 | 0.00 | 0.68 | 0.13 | 0.64 | 0.42 | 0.61 | 0.00 |
| Glycine (%) | 1.96 | 4.07 | 1.34 | 2.49 | 1.21 | 0.55 | 1.32 | 2.69 |
| Threonine (%) | 0.81 | 0.00 | 1.16 | 0.00 | 0.88 | 0.59 | 1.24 | 1.11 |
| Arginine (%) | 1.05 | 0.78 | 1.05 | 0.29 | 1.43 | 0.54 | 1.20 | 1.89 |
| Alanine (%) | 2.85 | 1.52 | 2.33 | 0.93 | 2.40 | 1.74 | 2.42 | 1.68 |
| Tyrosinase (%) | 0.45 | 0.29 | 0.47 | 0.28 | 0.58 | 0.65 | 0.60 | 0.66 |
| Cystinol (%) | 0.00 | 0.00 | 0.09 | 0.00 | 0.11 | 0.00 | 0.09 | 0.00 |
| Valine (%) | 1.45 | 1.14 | 1.31 | 0.42 | 1.20 | 1.03 | 1.32 | 2.62 |
| Methionine (%) | 0.35 | 0.27 | 0.72 | 0.65 | 0.67 | 0.43 | January 0.75 | 0.44 |
| Phenylalanine (%) | 0.79 | 0.41 | 0.82 | 0.56 | 0.70 | 1.22 | 0.86 | 1.37 |
| Isoleucine (%) | 0.87 | 0.55 | 0.83 | 0.33 | 0.86 | 0.83 | 0.87 | 1.32 |
| Leucine (%) | 2.16 | 0.90 | 2.00 | 1.43 | 1.84 | 3.29 | 2.19 | 2.20 |
| Lysine (%) | 0.67 | 2.67 | 0.62 | 1.65 | 0.81 | 0.29 | 0.79 | 0.62 |
| Proline (%) | 2.43 | 1.65 | 1.98 | 0.73 | 1.88 | 1.81 | 2.43 | 2.78 |
| Total amino acids (%) | 23.2 | 21.4 | 22.2 | 16.1 | 22.3 | 20.8 | 23.9 | 27.5 |
Overall, the proportion of amino acids in Sustar's products is higher than that in Zinpro's products.
Part 8 Effects of use
Effects of different sources of trace minerals on the production performance and egg quality of laying hens in the late laying period
Production Process
- Targeted chelation technology
- Shear emulsification technology
- Pressure spray & drying technology
- Refrigeration & dehumidification technology
- Advanced environmental control technology
Appendix A: Methods for the Determination of relative molecular mass distribution of peptides
Adoption of standard: GB/T 22492-2008
1 Test Principle:
It was determined by high performance gel filtration chromatography. That is to say, using porous filler as stationary phase, based on the difference in the relative molecular mass size of the sample components for separation, detected at the peptide bond of the ultraviolet absorption wavelength of 220nm, using the dedicated data processing software for the determination of relative molecular mass distribution by gel filtration chromatography (i.e., the GPC software), the chromatograms and their data were processed, calculated to get the size of the relative molecular mass of the soybean peptide and the distribution range.
2. Reagents
The experimental water should meet the specification of secondary water in GB/T6682, the use of reagents, except for special provisions, are analytically pure.
2.1 Reagents include acetonitrile (chromatographically pure), trifluoroacetic acid (chromatographically pure),
2.2 Standard substances used in the calibration curve of relative molecular mass distribution: insulin, mycopeptides, glycine-glycine-tyrosine-arginine, glycine-glycine-glycine
3 Instrument and equipment
3.1 High Performance Liquid Chromatograph (HPLC): a chromatographic workstation or integrator with a UV detector and GPC data processing software.
3.2 Mobile phase vacuum filtration and degassing unit.
3.3 Electronic balance: graduated value 0.000 1g.
4 Operating steps
4.1 Chromatographic conditions and system adaptation experiments (reference conditions)
4.1.1 Chromatographic column: TSKgelG2000swxl300 mm×7.8 mm (inner diameter) or other gel columns of the same type with similar performance suitable for the determination of proteins and peptides.
4.1.2 Mobile phase: Acetonitrile + water + trifluoroacetic acid = 20 + 80 + 0.1.
4.1.3 Detection wavelength: 220 nm.
4.1.4 Flow rate: 0.5 mL/min.
4.1.5 Detection time: 30 min.
4.1.6 Sample injection volume: 20μL.
4.1.7 Column temperature: room temperature.
4.1.8 In order to make the chromatographic system meet the detection requirements, it was stipulated that under the above chromatographic conditions, the gel chromatographic column efficiency, i.e., the theoretical number of plates (N), was not less than 10000 calculated on the basis of the peaks of the tripeptide standard (Glycine-Glycine-Glycine).
4.2 Production of relative molecular mass standard curves
The above different relative molecular mass peptide standard solutions with a mass concentration of 1 mg / mL were prepared by mobile phase matching, mixed in a certain proportion, and then filtered through an organic phase membrane with the pore size of 0.2 μm~0.5 μm and injected into the sample, and then the chromatograms of the standards were obtained. Relative molecular mass calibration curves and their equations were obtained by plotting the logarithm of relative molecular mass against retention time or by linear regression.
4.3 Sample treatment
Accurately weigh 10mg of sample in a 10mL volumetric flask, add a little mobile phase, ultrasonic shaking for 10min, so that the sample is fully dissolved and mixed, diluted with mobile phase to the scale, and then filtered through an organic phase membrane with a pore size of 0.2μm~0.5μm, and the filtrate was analyzed according to the chromatographic conditions in A.4.1.
5. Calculation of relative molecular mass distribution
After analyzing the sample solution prepared in 4.3 under the chromatographic conditions of 4.1, the relative molecular mass of the sample and its distribution range can be obtained by substituting the chromatographic data of the sample into the calibration curve 4.2 with GPC data processing software. The distribution of the relative molecular masses of the different peptides can be calculated by the peak area normalization method, according to the formula: X=A/A total×100
In the formula: X - The mass fraction of a relative molecular mass peptide in the total peptide in the sample, %;
A - Peak area of a relative molecular mass peptide;
Total A - the sum of the peak areas of each relative molecular mass peptide, calculated to one decimal place.
6 Repeatability
The absolute difference between two independent determinations obtained under conditions of repeatability shall not exceed 15% of the arithmetic mean of the two determinations.
Appendix B: Methods for the Determination of Free Amino Acids
Adoption of standard: Q/320205 KAVN05-2016
1.2 Reagents and materials
Glacial acetic acid: analytically pure
Perchloric acid: 0.0500 mol/L
Indicator: 0.1% crystal violet indicator (glacial acetic acid)
2. Determination of free amino acids
The samples were dried at 80°C for 1 hour.
Place the sample in a dry container to cool naturally to room temperature or cool down to a usable temperature.
Weigh approximately 0.1 g of sample (accurate to 0.001 g) into a 250 mL dry conical flask.
Quickly proceed to the next step to avoid the sample from absorbing ambient moisture
Add 25 mL of glacial acetic acid and mix well for no more than 5 min.
Add 2 drops of crystal violet indicator
Titrate with 0.0500 mol / L (±0.001) standard titration solution of perchloric acid until the solution changes from purple to the end point.
Record the volume of standard solution consumed.
Carry out the blank test at the same time.
3. Calculation and results
The free amino acid content X in the reagent is expressed as a mass fraction (%) and is calculated according to the formula: X = C × (V1-V0) × 0.1445/M × 100%, in tne formula:
C - Concentration of standard perchloric acid solution in moles per liter (mol/L)
V1 - Volume used for titration of samples with standard perchloric acid solution, in milliliters (mL).
Vo - Volume used for titration blank with standard perchloric acid solution, in milliliters (mL);
M - Mass of the sample, in grams (g ).
0.1445: Average mass of amino acids equivalent to 1.00 mL of standard perchloric acid solution [c (HClO4) = 1.000 mol / L].
Appendix C: Methods for the Determination of Sustar's chelation rate
Adoption of standards: Q/70920556 71-2024
1. Determination principle (Fe as an example)
Amino acid iron complexes have very low solubility in anhydrous ethanol and free metal ions are soluble in anhydrous ethanol, the difference in solubility between the two in anhydrous ethanol was utilized to determine the chelation rate of amino acid iron complexes.
2. Reagents & Solutions
Anhydrous ethanol; the rest is the same as clause 4.5.2 in GB/T 27983-2011.
3. Steps of analysis
Do two trials in parallel. Weigh 0.1g of the sample dried at 103±2℃ for 1 hour, accurate to 0.0001g, add 100mL of anhydrous ethanol to dissolve, filter, filter residue washed with 100mL of anhydrous ethanol for at least three times, then transfer the residue into a 250mL conical flask, add 10mL of sulfuric acid solution according to clause 4.5.3 in GB/T27983-2011, and then perform the following steps according to clause 4.5.3 “Heat to dissolve and then let cool” in GB/T27983-2011. Carry out the blank test at the same time.
4. Determination of total iron content
4.1 The principle of determination is the same as clause 4.4.1 in GB/T 21996-2008.
4.2. Reagents & Solutions
4.2.1 Mixed acid: Add 150mL of sulfuric acid and 150mL of phosphoric acid to 700mL of water and mix well.
4.2.2 Sodium diphenylamine sulfonate indicator solution: 5g/L, prepared according to GB/T603.
4.2.3 Cerium sulfate standard titration solution: concentration c [Ce (SO4) 2] = 0.1 mol/L, prepared according to GB/T601.
4.3 Steps of analysis
Do two trials in parallel. Weigh 0.1g of sample, accurate to 020001g, place in a 250mL conical flask, add 10mL of mixed acid, after dissolution, add 30ml of water and 4 drops of sodium dianiline sulfonate indicator solution, and then perform the following steps according to clause 4.4.2 in GB/T21996-2008. Carry out the blank test at the same time.
4.4 Representation of results
The total iron content X1 of the amino acid iron complexes in terms of mass fraction of iron, the value expressed in %, was calculated according to formula (1):
X1=(V-V0)×C×M×10-3×100
In the formula: V - volume of cerium sulfate standard solution consumed for titration of test solution, mL;
V0 - cerium sulfate standard solution consumed for titration of blank solution, mL;
C - Actual concentration of cerium sulfate standard solution, mol/L
5. Calculation of iron content in chelates
The iron content X2 in the chelate in terms of the mass fraction of iron, the value expressed in %, was calculated according to the formula: x2 = ((V1-V2) × C × 0.05585)/m1 × 100
In the formula: V1 - volume of cerium sulfate standard solution consumed for titration of test solution, mL;
V2 - cerium sulfate standard solution consumed for titration of blank solution, mL;
C - Actual concentration of cerium sulfate standard solution, mol/L;
0.05585 - mass of ferrous iron expressed in grams equivalent to 1.00 mL of cerium sulfate standard solution C[Ce(SO4)2.4H20] = 1.000 mol/L.
m1-Mass of the sample, g. Take the arithmetic mean of the parallel determination results as the determination results, and the absolute difference of the parallel determination results is not more than 0.3%.
6. Calculation of chelation rate
Chelation rate X3, the value expressed in %, X3 = X2/X1 × 100
Appendix C: Methods for the Determination of Zinpro's chelation rate
Adoption of standard: Q/320205 KAVNO7-2016
1. Reagents and materials
a) Glacial acetic acid: analytically pure; b) Perchloric acid: 0.0500mol/L; c) Indicator: 0.1% crystal violet indicator (glacial acetic acid)
2. Determination of free amino acids
2.1 The samples were dried at 80°C for 1 hour.
2.2 Place the sample in a dry container to cool naturally to room temperature or cool down to a usable temperature.
2.3 Weigh approximately 0.1 g of sample (accurate to 0.001 g) into a 250 mL dry conical flask
2.4 Quickly proceed to the next step to avoid the sample from absorbing ambient moisture.
2.5 Add 25mL of glacial acetic acid and mix well for no more than 5min.
2.6 Add 2 drops of crystal violet indicator.
2.7 Titrate with 0.0500mol/L (±0.001) standard titration solution of perchloric acid until the solution changes from purple to green for 15s without changing color as the end point.
2.8 Record the volume of standard solution consumed.
2.9 Carry out the blank test at the same time.
3. Calculation and results
The free amino acid content X in the reagent is expressed as a mass fraction (%), calculated according to formula (1): X=C×(V1-V0) ×0.1445/M×100%...... .......(1)
In the formula: C - concentration of standard perchloric acid solution in moles per liter (mol/L)
V1 - Volume used for titration of samples with standard perchloric acid solution, in milliliters (mL).
Vo - Volume used for titration blank with standard perchloric acid solution, in milliliters (mL);
M - Mass of the sample, in grams (g ).
0.1445 - Average mass of amino acids equivalent to 1.00 mL of standard perchloric acid solution [c (HClO4) = 1.000 mol / L].
4. Calculation of chelation rate
The chelation rate of the sample is expressed as mass fraction (%), calculated according to formula (2): chelation rate = (total amino acid content - free amino acid content)/total amino acid content×100%.
Post time: Sep-17-2025
